DNA含量与滑膜肉瘤的关系

　　DNA含量分析技术是80年代以来迅速发展的一门新型检测技术，已广泛应用于肿瘤临床及基础理论的研究。其中流式细胞术(Flowcytometry,FCM)是一种快速定量分析细胞核DNA含量的技术，其在推测患者预后及治疗反应上具有重要的价值[1]。滑膜肉瘤的组织结构复杂，目前尚无统一的分类及预后判定标准。研究表明，滑膜肉瘤患者的预后与其肿瘤细胞　1　材料与方法

　　1.1临床资料

　　1.1.1资料选择选择1984年至1993年在我院进行诊治的原发滑膜肉瘤52例，病例资料完整，术前均未进行化疗及放疗，行软组织肿瘤扩大切除术，术后采用VAMC方案进行化疗。其中男性30例，女性22例;男女之比1.4:1，34例分布于 30～50岁之间，占本组资料的65.5%。

　　1.1.2肿瘤大小、局部浸润及临床分期52例肿瘤最大直径21cm，最小直径2cm，其中6例≤5cm，余46例肿瘤直径均>5cm。经病理证实6例局部骨侵袭，7例区域淋巴结转移。根据软组织肉瘤临床分期标准进行临床分期[3]，其中Ⅲa6例，Ⅲb33例，Ⅲc7例，Ⅳa6例。

　　1.1.3随访本组资料平均随访日期为41个月，最长为62个月，最短为17个月。所有患者术前均经X线证实无1例肺转移，治疗后经X线证实肺转移21例。

　　1.1.4病理分型对全部病理资料重新进行复查，根据肿瘤细胞有向上皮成分和梭形成分双向分化的趋势，将滑膜肉瘤分为单相型及双相型。

　　1.2滑膜肉瘤流式细胞分析及方法

　　1.2.1样品来源确含肿瘤组织的石蜡包埋的组织块在切片机上切取35μm厚组织片7片，经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，胃蛋白酶消化，再以300目尼龙筛网滤去未消化的组织碎片，用75%的乙醇固定制备好的单细胞，4℃保存，备检。

　　1.2.2制备好的单细胞悬液涂片，HE染色，显微镜下检查肿瘤消化情况，了解单细胞悬液的产量。1.2.3应用溴化乙啶一步插入法进行染色，检测前弃去待测样品中的乙醇将细胞调整至1×104个/ml，在其内加入5%的鸡红细胞作对照与标本同步染色。

　　1.2.4用美国产FACS-420型流式细胞仪检测样品，波长488nm，功率为300mW的氩离子为激发光源，变异系数稳定在5%以内，每例标本测定1.5万～2.5万个细胞，平均为2万个。

　　1.3结果判定

　　1.3.1DNA指数(DNAIndex)表示DNA倍体水平DI=测定细胞(G0/G1峰均道值)/内标细胞(G0/G1峰均道值)×2.85

　　本实验内标细胞为鸡红细胞，测定二倍体的鸡红细胞DNA含量为正常人淋巴细胞含量的35%，故乘常数2.85。依据DI值判定DNA倍体，本组资料以DI=0.9～1.10为二倍体及近二倍体，其它为异倍体。

　　1.3.2细胞周期细胞周期由计算机确定G0/G1期、S期、M/G2期三期细胞的道数范围后，将落在各自道次上的细胞数叠加总合而得。增殖细胞指数PI=[(S+M/G2)/(G0/G1核的有丝分裂率有一明显的相关性[2]，因此，我们拟应用FCM对其进行回顾性研究，探讨DNA含量在滑膜肉瘤患者预后判定中的作用。