获得性血友病的全面诊断

　　如患者无既往或家族出血史而突然发生出血，仅APTT延长，血浆混合试验证明存在自身抗体，Bethesda试验或ELISA、免疫沉淀法进行抗体定量，FⅧ：C减低，就可明确诊断AH。 　　鉴别诊断： 　　AH要与血友病甲、血友病乙等先天性凝血因子缺陷症、除FⅧ外的其他凝血因子的获得性抗体等疾病鉴别。除先天性凝血因子缺陷症患者可有家族史、自幼有关节等部位出血特点外，鉴别诊断主要依靠实验室的检查和相关凝血因子活性检测。

　　实验室检查：

　　1.激活的部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和血小板功能检查 当APTT延长、PT和血小板功能正常时应考虑有无自身抗体存在 是检查自身抗体的筛选试验。

　　2.血浆混合试验 当仅有APTT延长时 应进行血浆混合试验测定APTT以确定抗体的存在。如APTT仍延长5s或以上为抗体存在。当内凝血途径某一因子（FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅧ）缺乏时 正常血浆与患者血浆等量混合可纠正延长的APTT；但是 当有抗体存在时，等量血浆混合后延长的APTT、不能得到纠正。

　　3.Bethesda试验 一旦确定存在自身抗体，就应对抗体进行定量以评估出血的严重程度和危险性，常用的方法是Bethesda法，即检测患者血浆灭活正常血浆中FⅧ的能力。一个Bethesda单位定义为检测体系中剩余FⅧ活性为50%时的患者血浆稀释度。但是，该方法缺乏敏感性尤其是当抗体为低滴度时。

　　4.改良Bethesda试验 即将患者血浆与缓冲液稀释后的正常人血浆共同温育以保证体系pH值的恒定，同时将缓冲液稀释后的正常人血浆与乏FⅧ血浆一起温育作为对照。改良法提高了敏感性，尤其适合用于低滴度抗体的检测。因此，被推荐为检测抑制性抗体的首选方法。

　　5.ELISA法 用重组FⅧ包被，4℃过夜；鱼胶封闭非特异性位点，加入经稀释的患者血浆并37℃孵育；再加入辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG，四甲基二氢氯化联苯胺（TMB）作为发色底物，盐酸终止反应，450nm处测吸光度（A）。该方法能检测所有抗FⅧ抗体，包括抑制性和非抑制性的自身抗体和同种抗体。

　　6.免疫沉淀法（IP） 患者稀释血浆与125I标记的FⅧ分子的A1、A2、C2、轻链片段共同孵育后，再加入蛋白G-sephrose结合的磁珠；用γ计数仪测定结合的放射活性；结果表示为免疫沉淀单位/ml，计算公式为：1-（结合放射活性/总放射活性一背景放射活性）×血浆稀释倍数×16.7。该方法的敏感性和特异性与ELISA相同，也能检测所有抗FⅧ抗体，包括抑制性和非抑制性的自身抗体和同种抗体。

　　7.FⅧ：C检测 一期法不能判定FⅧ：C减低是因FⅧ自身抗体还是狼疮抗凝物质引起。二期法则可鉴别，因在狼疮抗凝物质存在时FⅧ：C水平正常或甚至增加；也可用血小板中和试验或稀释的RVVT来鉴别。 　　其它辅助检查： 　　根据病情，临床表现、症状、体征选择做心电图 B超、X线 CT、MRI、生化等检查。